使用UPLC與ICP-MS/MS及ESI-MS/MS在線聯(lián)用，可同時獲得多維度的重要表征數(shù)據(jù)。如圖1所示，將待測樣品各組分經UPLC分離后，ICP-MS/MS和ESI-MS/MS兩個質譜作為檢測器通過遠程電纜連接，允許同時開始運行檢測。通過液相的保留時間及與標準物質的對比，可對已知的化合物形態(tài)進行定性，通過ICP-MS/MS、ESI-MS/MS同時獲得元素定性定量、化合物母離子、子離子碎片等關鍵信息。

使用UPLC與ICP-MS/MS及ESI-MS/MS在線聯(lián)用，可同時獲得多維度的重要表征數(shù)據(jù)。如圖1所示，將待測樣品各組分經UPLC分離后，ICP-MS/MS和ESI-MS/MS兩個質譜作為檢測器通過遠程電纜連接，允許同時開始運行檢測。通過液相的保留時間及與標準物質的對比，可對已知的化合物形態(tài)進行定性，通過ICP-MS/MS、ESI-MS/MS同時獲得元素定性定量、化合物母離子、子離子碎片等關鍵信息。

圖2 液相-ICP & ESI 質譜二聯(lián)機數(shù)據(jù)、原理示意圖

此方法具有對潛在未知化合物進行表征的能力。如圖2所示，使用已知形態(tài)標準物質的保留時間進行定性的前提下，在一個新的保留時間下出現(xiàn)的未知形態(tài)組分同時在ICP-MS/MS與ESI-MS/MS的色譜圖中出峰時，可根據(jù)ICP-MS/MS得到元素定性定量信息，而針對ESI-MS/MS提供的化合物結構碎片離子信息可通過篩選主要碎片離子峰，得到質荷比與相對豐度的信息，隨后通過判斷分子離子峰的碎片脫落行為、篩選亞穩(wěn)離子、以重要離子質荷比的奇偶性為依據(jù)，判斷此化合的裂解類型與過程，推斷其官能團與骨架結構等信息，隨后按多種對已知結構碎片及剩余結構碎片進行重組，得到可能的多類結構式，根據(jù)質譜或其它技術手段排除不可能存在的結構式，最終得到潛在可能的結構式①。

上述離子碎片數(shù)據(jù)的解析步驟過程，均有成熟理論分析作為依據(jù)：有機分子在得到子離子的過程中，存在1）簡單開裂（α-裂解、i-裂解、σ-裂解）；2）重排裂解：已有的麥氏重排和逆Diels-Alder開裂，以及低能碰撞誘導離解中鍵裂解過程中氫重排的9條規(guī)則②。

• UPLC條件優(yōu)化

本實驗均采用譜育科技EXPEC 520型UPLC模塊進行，詳細色譜工作條件見表1.

表1 液相色譜工作條件

• ICP-MS/MS條件優(yōu)化

在ICP-MS/MS中采用質量轉移模式可有效消除Se所遭受的質譜干擾，顯著降低檢出限：通入反應氣O2，將Se+離子轉化為相應的SeO+產物離子的方法可以顯著消除質譜干擾，其原理如下圖所示。

圖3 O2反應模式下MS/MS質譜質量轉移和干擾消除示意圖

• ESI-MS/MS條件優(yōu)化

利用碰撞誘導解離產生的準分子離子信息及碎片離子信息，選擇2~3個強度較大的特征產物離子建立MRM定量方法，即可實現(xiàn)對硒形態(tài)的分析測定。表2給出了這幾種待測化合物的主要碎片結構信息。

表2 硒代氨基酸化合物的主要碎片結構信息

圖4 UPLC-ICP & ESI-MS/MS二聯(lián)質譜聯(lián)用儀測定4種Se形態(tài)的譜圖

利用UPLC-ICP-MS/MS和UPLC-ESI-MS/MS相結合的測試方式，結果如圖4所示，上部分譜圖為UPLC-ICP-MS/MS端出峰情況，下部分譜圖為UPLC-ESI-MS/MS端出峰情況，4種硒形態(tài)的分離順序完全一致，硒形態(tài)完全分離且分離度均大于1.5，相對保留時間最小誤差約：0~0.3 min。